1.2.1 放射免疫分析法测试人血清中的甲胎蛋白
1．实验原理
放射免疫分析法首先基于抗原抗体特异性结合的原理。抗原与抗体结合会形成抗原-抗体复合物，当抗原被放射性物质标记后，便和抗体形成了“标记抗原-抗体”复合物。如果一个反应体系中既有标记抗原，又有非标记抗原，则两种抗原会竞争性地与抗体相结合，生成的“标记抗原-抗体”复合物与非标记抗原的含量在一定范围内成反比。实验原理如图1-6所示。
图1-6 放射免疫分析法实验原理
资料来源：曹雪涛主编《免疫学技术及其应用》
本实验中，125I标记的人AFP抗原（∗AFP）会与人血清中的AFP竞争性结合抗AFP抗体（如图1-7所示），当反应体系中∗AFP与抗AFP抗体（Ab）的量恒定时，形成∗AFP-Ab复合物（此时结合态∗AFP的量用B表示）的多少取决于体系中AFP（未被125I标记）的量，如果AFP多，则∗AFP-Ab复合物生成量就少，游离∗AFP（此时游离态∗AFP的量用F表示）就多，反之亦然。如果分别测定∗AFP-Ab复合物和游离∗AFP的放射性强度，就可计算出结合态∗AFP（B）与游离态∗AFP（F）的比值（B/F），或计算出其结合率（B/T）（T为B与F的总和），这与标本中的抗原量呈函数关系。基于以上原理，预先用标准品AFP绘制标准曲线，进而通过对待测样品进行检测，从而根据标准曲线计算出样品中AFP的含量。
2．应用举例
（1）实验仪器、耗材及试剂
①人AFP标准品。
②125I标记的人AFP。
③抗人AFP抗体。
图1-7 人AFP抗原的放射免疫分析检测原理
资料来源：钱旻主编《免疫学原理与技术》
④待测人血清样品。
⑤生理盐水。
⑥分离剂（可选择抗人AFP抗体的二抗、聚乙二醇、活性炭等）。
⑦试管。
⑧加样器。
⑨离心机。
⑩放射免疫测量仪。
（2）实验步骤
①配置不同浓度（如0、1、3.0、9.0、27.0、81.0μg/L）人AFP标准品溶液各200μL，分别加入测定管（管1～6）中。每个浓度设定2个重复测定管。每管均加入100μL125I标记的人AFP和100μL抗人AFP抗体，充分混匀。
②标记好T管（总计数管）。T管中加入100μL125I标记的人AFP。
③标记好NSB管（非特异性结合管）。NSB管中加入100μL125I标记的人AFP和100μL生理盐水。
④待所有管内加好溶液，置于4 ℃冰箱中孵育24h。
⑤向管1～6中加入分离剂500μL，室温静置15min。
⑥于3500r/min下离心20min，弃上清，用放射免疫测量仪测定沉淀的放射性强度。
⑦计算每个浓度的两个重复测定管放射性度数的平均值并做记录。第一管均值为B0，其余各管均值（B1～B5）均与之相比（Bn/B0）。以lg（Bn/B0）为纵坐标，标准品浓度的自然对数值（lnC）为横坐标作标准曲线。
⑧取适量待测血样，用生理盐水稀释10倍，设定2～3个重复测定管。每管中均加入100μL125I标记的人AFP和100μL抗人AFP抗体，充分混匀后，置于4 ℃冰箱中孵育24h。
⑨加入分离剂500μL，室温静置15min。
⑩于3500r/min下离心20min，弃上清，用放射免疫测量仪测定沉淀的放射性强度（Bx）。
⑪计算Bx/B0，并根据标准曲线求出待测血清中AFP的浓度。